三角細胞搖瓶是一種常用的細胞培養耗材,主要用于各種懸浮細胞的培養,小容量的瓶子也可以用于培養基的制備或儲存。在培養CHO細胞時,就會用到這種耗材。搖瓶種子制備流程如下:
1、培養基配制
搖瓶種子以培養具有強生長活性的營養菌體為目的,因而在配制培養基時必須全面、均衡地滿足菌體生長對各種營養物質的要求,包括碳源、氮源、無機鹽、生長因子等。搖瓶種子在培養過程中不便于調節PH,因此在選擇培養基時要考慮培養過程中PH的穩定,可以通過生理酸、堿性物質的平衡搭配及加入磷酸鹽、碳酸鈣之類緩沖劑來實現。
2、接種
搖瓶種子的接種一般采用斜面種子挖塊法或米孢子粒計數接入法。這種接種方式難于掌握一致的接種量,可能會影響種子質量的穩定。對接種量敏感的菌種,盡量采用懸液接種法,即用無菌蒸餾水將斜面種子或米孢子粒上的細胞或孢子洗下,制成細胞或孢子懸液,然后按一定體積或一定細胞數接種至搖瓶種子培養基中。
3、培養
在恒溫室內的搖床上進行培養,一般選用旋轉式搖床,這樣更利于培養時氣體交換。為了使細胞搖瓶中的水分蒸發量保持穩定,恒溫室也應控制好濕度。